人ELISA檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定樣品中人檢測試劑盒的水平。向預先包被了人檢測試劑盒單克隆抗體的酶標孔中加入檢測試劑盒，溫育；溫育后，加入生物素標記的檢測試劑盒抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人檢測試劑盒的濃度呈正相關，試劑盒的合理操作尤為重要，以下是檢測試劑盒試驗操作要點。

為了確保實驗的成功大家有必要了解一下！

1、為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

2、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

3、配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

4、各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

5、實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預熱。

6、手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

8、每次試驗測定的同時做標準曲線。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。

9、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

10、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

11、從2-8℃取出的ELISA檢測試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

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